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C 端测序

基于蛋白质的生物制药是在工程细胞中通过复杂的过程生产的，可能包含各种各样的变异和翻译后修饰，必须监控或控制以确保产品质量。

利用稳健的克隆、表达、纯化和分析方法，在哺乳动物细胞中生产重组蛋白已经非常成熟。然而，意想不到的翻译后修饰（PTMs）或蛋白质产物变异可能会发生。这些可能包括不寻常的或意想不到的糖基化、氧化、脱酰胺化、糖基化、磷酸化、硫代化、S-硫代化、序列扩展等等。液相色谱-质谱联用或串联质谱联用（LC-MS 和 LC-MS/MS）已成为鉴定共价修饰（如 PTMs）或截断引起的质量差异的分析“工具箱”的首选。高分辨率和质量精度的质谱仪器，如电喷雾电离飞行时间（ESI-TOF）仪器，也有助于对这些变化进行有信心的识别。甚至更高的质量精度可以通过某些仪器如轨道阱或傅里叶变换-离子回旋共振（FT-ICR）获得。高分辨率仪器，加上 MS/MS 的功能，使 MS 成为蛋白质治疗表征中不可缺少的工具，在最近的生物制品许可申请中使用是比较频繁显见的。

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最近研发发现通过质谱分析，在稳定转染的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中发现了大量低水平（~ 1-5%）的杂质。这些分子包括抗体和 Fc 融合蛋白，其中 Fc 位于构建物的 C 端。经液相色谱-质谱（LC-MS）测定，杂质比预期质量大~1177Da。经过胰酶消化和 LC-MS/MS 分析，杂质以 Fc 序列延伸的形式定位到 Fc 的 C 端。利用不同的标准化碰撞能量（NCE）对扩展肽的两个电荷态进行目标高能量碰撞解离，导致几乎完全的片段离子覆盖。通过从头测序获得的氨基酸序列 SLSLSPEAEAASASELFQ 与转染 CHO 细胞所用的载体序列的一部分相匹配，特别是在蛋白质编码序列下游的选择盒的启动子区域。该修饰是一个意外的剪接事件的结果，由常用的 GGU 密码子的 C 端甘氨酸与一致的剪接供体相似引起。对甘氨酸的3个替代密码子进行了测试，结果表明，这些替代密码子完全消除了不需要的 C 端延伸，从而提高了产品质量。

选择性剪接在真核生物中是一种正常的、受调节的过程，能够从较少的基因中产生多种蛋白质产物。替代剪接和非预期剪接对生物疗法生产的影响，以及它是否合格作为一个关键的质量属性，确很少被讨论。

Aimsmass是一家可靠的生物制药合作伙伴，拥有专业的蛋白质组学研究资源。我们用一流的实验平台和成熟的技术手段为您提供优质的一站式服务。生物制药行业的质量控制需要蛋白质和多肽药物分子 C 末端序列的识别和结构分析的信息。特别是 ICH Q6B 指南要求蛋白质（肽）药物的 C 端序列信息。为此，我们将为您提供全面的 C 端测序技术服务。我们将围绕 ICH 指南（特别是 ICH Q6B），为您提供全面的符合 GLP/cGMP 要求的 C-末端测序分析服务。