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蛋白质等电点分析

等电聚焦（IEF）是确定蛋白质等电点（pI）最常用、应用最广泛的方法。在 IEF 过程中，给定样品的蛋白质通过 ph 梯度凝胶电泳分解。由于蛋白质在 IEF 中的电泳迁移率取决于它们的净正电荷或负电荷，一旦达到中性 pH 值（蛋白质不再携带净正电荷或负电荷的 pH 值），蛋白质就会保持在相应的 pH值中稳定。这个蛋白质变成中性（或等电）的 pH 值称为蛋白质的 pI。

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蛋白质在固定 ph 梯度凝胶（IPG）上的电泳迁移率取决于其总正电荷（酸性）或负电荷（碱性），这是 IEF 技术的基本原理。在等电聚焦（IEF）中，带净正电荷或负电荷的蛋白质通过 pH 梯度凝胶迁移，直到到达等电点（pI），即保持中性的 PH 值。因此，蛋白质的pI表示其净电荷，这是决定其在特定环境中稳定性/活性的关键因素。通常，第一维 IPG-IEF 之后是第二维 IPG-IEF，聚焦的蛋白质被变性/还原并在 SDS-PAGE 凝胶上解析，用于随后的免疫印迹来验证蛋白质的身份。最近发展的一维、垂直的 IEF 和免疫印迹技术使多个样本的并发分析（pI 测定）成为可能。

IEF 和 cIEF 是 pI 测定中最常用的两种技术，它们可以根据 pI 的不同对蛋白质和多肽进行分离。在 IEF 中，将采用商业化的固定 pH 梯度（IPG）条带或 pH 梯度的一维垂直 IEF 凝胶，与 IPG 条带相比，后者可以以更简单、更节省时间的方式分析多个样品。对于 cIEF，它缩短了分析时间，减少了样品的消耗。在装入毛细管之前，样品将首先与精确的等电点标记剂、两性电解质和稳定剂混合。在毛细管中聚焦完成后，可原位检测蛋白样品的 pI。Aimsmass 有两种方法可用于pI测定，我们的科学家将根据您的特殊要求和样品类型优化方案。