敲除细胞池是使用 CRISPR-Cas9 技术生成的异质细胞群体，其中特定基因被靶向敲除。该过程涉及设计和合成靶向感兴趣基因的导向 RNA（gRNA），将 CRISPR-Cas9 试剂转染到细胞中，并允许细胞增殖。由于转染效率和 CRISPR-Cas9 活性不会达到100％，敲除细胞池将是具有不同基因型的细胞混合物。
1.设计和构建 CRISPR-Cas9 试剂：包括设计和合成靶向感兴趣基因的导向 RNA（gRNA）。
2.细胞转染：将 CRISPR-Cas9 试剂与 gRNA 一起转染到目标细胞中，使用电穿孔或脂质介导转染等方法。
3.转染细胞的筛选：转染后，通常使用适当的标记物（如抗生素抗性或荧光蛋白）对细胞进行筛选，以富集摄取 CRISPR-Cas9 试剂的细胞。
4.转染细胞的扩增：选择的细胞在培养中被允许增殖和扩展，以生成敲除细胞池。
5.敲除效率分析：可以使用 PCR、Western blotting 或测序等各种方法评估敲除池的敲除效率，以确认目标基因的破坏。
6.敲除池的表征：通过分析细胞的异质性并评估基因敲除的功能后果来表征敲除池。
需要注意的是，敲除细胞池是一种由具有不同基因型的细胞组成的异质混合物，因为转染效率和 CRISPR-Cas9 活性并不是100％高效的。这与克隆敲除细胞系形成对比，后者涉及隔离和扩增具有特定敲除基因型的单个细胞。
实验流程 |
 |
服务流程 |
|
