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N-豆蔻酰修饰位点鉴定

蛋白质脂化是一种常见的蛋白质共翻译或翻译后修饰,在人类生理和病理中起着重要作用。一种形式的蛋白质脂化,棕榈酰化,涉及到在蛋白质上添加一个16碳脂肪酸(棕榈酸)的部分,调节蛋白质的运输,稳定性和活性。

一般来说,蛋白棕榈酰化发生在亲核侧链的氨基酸残基上,如Cys、Ser/Thr和Lys以及蛋白的氨基端,分别导致S-棕榈酰化(硫酯键)、O-棕榈酰化(酯键)和N -棕榈酰化(酰胺键)。

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N-豆蔻酰修饰位点鉴定

另一方面,N -肉豆蔻酰基化是通过酰胺键在N端甘氨酸残基的a-氨基上添加一个14-碳脂肪酸。

肉豆蔻酰化是一种14-碳的饱和脂肪酸,肉豆蔻酸,附着在一个真核蛋白质亚群的N端甘氨酸上。虽然经常被称为蛋白翻译后修饰PTM,但它通常发生共翻译,当核糖体聚合不到100个残基时,并在去掉领头的蛋氨酸之后发生甲硫氨酸氨基肽酶的残留物,暴露N端甘氨酸。

N-豆蔻酰修饰位点鉴定服务流程

催化肉豆蔻酸转移的酶是肉豆蔻酰基辅酶a:N-肉豆蔻酰基转移酶(NMT)。肉豆蔻酰辅酶a底物首先与载脂蛋白酶结合,引起构象变化,从而允许肽底物结合。N端甘氨酸胺攻击肉豆蔻酰基辅酶a (myr-CoA)硫酯,通过亲核取代进行化学转化;先释放CoA产物,再释放肉豆蔻酰基化肽。

由于缺乏高效、特异、快速、高灵敏度的检测方法,对蛋白质豆蔻酰化的研究一直很困难。传统的方法依赖于将放射性标记的脂肪酸代谢结合到蛋白质中,并结合免疫沉淀法来检测目标豆蔻酰化蛋白。

AIMS提供的是高效专业的蛋白质豆蔻酰化修饰位点鉴定服务,有专业的HPLC-MS/MS质谱平台,可以分析各种物样本。

服务流程

点击化学法

  • 对目标修饰蛋白进行标记,通过使用标记类似物(metabolic labeling)
  • 催化反应,促使发生棕榈酰修饰蛋白带上生物素标签(click chemistry)
  • 用亲和链霉素珠子富集发生修饰的肽段(peptide enrichment)
  • 对发生修饰的肽段进行质谱检测(LC-MS/MS analysis)
点击化学法

服务优势

  • 操作容易简单:不需同位素标记,实验流程简单
  • 高精度与准确性::可鉴定分析具体修饰位点,采用Thermo Fisher质谱仪,获取更多肽段信息,找到更多修饰位点
  • 检测范围广):可检测各种细胞或者组织中的豆蔻酰化修饰位点

服务流程

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