蛋白质异戊烯化是一种关键的翻译后修饰，通过在蛋白质C末端附近的半胱氨酸残基上添加法尼基或香叶基类异戊二烯基团，调控蛋白质的膜定位、蛋白互作及信号转导。该修饰与多种疾病（如癌症、神经退行性疾病）相关，是重要的药物研发靶点。本试剂盒基于点击化学（Click Chemistry）原理，结合免疫印迹法（Western Blot），实现对特定靶蛋白异戊烯化修饰的快速、特异性检测。试剂盒包含优化的探针标记、细胞裂解、生物素点击标记及捕获检测的全套缓冲液，无需额外配置复杂试剂，简化实验流程。
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 检测原理 | 点击化学（CuAAC）结合免疫印迹 |
| 检测修饰类型 | 蛋白质法尼基化与香叶基化（混合异构体） |
| 检测方法 | 免疫印迹法（Western Blot） |
| 结果读取 | 链霉亲和素-HRP（Streptavidin-HRP）化学发光检测 |
| 样本起始 | 活体细胞（需先进行代谢探针标记） |
| 保存条件 | 所有组分4℃保存（详见组分表） |
| 运输条件 | 冰袋运输，收货后请立即置于4℃ |
| 试剂名称 | 试剂编号 | 体积（正式） | 储存温度 |
|---|---|---|---|
| Probe reaction buffer | Solution I | 260 µL | 4℃ |
| Lysis Buffer | Solution II | 10 mL | 4℃ |
| CUAAC click labeling Buffer | Solution III | 450 µL | 4℃ |
| Blocking Reagent | Solution IV | 340 µL | 4℃ |
| Strepdavidin-Beads | Solution V | 1300 µL | 4℃ |
| 说明书 | 1 份 |
| 试剂名称 | 试剂编号 | 体积（正式） | 储存温度 |
|---|---|---|---|
| Probe reaction buffer | Solution I | 60 µL | 4℃ |
| Lysis Buffer | Solution II | 2 mL | 4℃ |
| CUAAC click labeling Buffer | Solution III | 80 µL | 4℃ |
| Blocking Reagent | Solution IV | 80 µL | 4℃ |
| Strepdavidin-Beads | Solution V | 260 µL | 4℃ |
| 说明书 | 1 份 |
本试剂盒基于点击化学（Click Chemistry）中的铜催化叠氮-炔环加成（CuAAC）反应。首先利用带有炔基（或叠氮）的异戊烯类探针对活细胞中的异戊烯化蛋白进行代谢标记，然后裂解细胞，通过CuAAC反应将带有生物素（或叠氮）的标签连接到标记的蛋白上，最后利用链霉亲和素-HRP进行Western Blot检测。该方法对法尼基化和香叶基化修饰均有良好的检测能力。
完整的实验流程通常需要2-3天，具体取决于细胞培养、探针标记孵育时间以及Western Blot步骤。主要时间分布为：探针标记（通常过夜孵育，~16小时）→ 细胞裂解与处理（2-3小时）→ 点击化学标记反应（2小时）→ 免疫印迹检测（1-2天）。试剂盒提供了优化的缓冲液，可简化操作步骤。
所有主要缓冲液组分（Solution I-V）均需在4℃条件下保存。请勿冷冻。其中Solution III（CUAAC click labeling Buffer）含有铜催化剂，应避免反复冻融和光照。建议在收到产品后，按照单次实验用量进行分装，并于4℃稳定保存。工作液建议现配现用。
本试剂盒使用的探针和化学标记方法可同时检测蛋白质的法尼基化（15碳）和香叶基化（20碳）修饰，即混合异构体检测。它适用于检测CAAX box或含有异戊烯化修饰半胱氨酸残基的蛋白。
