蛋白质的硫醇残基可以通过与NO集团和不同的硫醇底物发生特定反应形成S-亚硝基硫醇，其可以直接与NO作用也可通过在硫醇盐和S-亚硝基谷胱甘肽（GSNO）反应时形成。由于此过程的可逆性，后一种化合物GSNO也同样促进S-亚硝基化反应，因此会在氧化还原对GSH/GSNO和氧化还原对蛋白-SH/蛋白-SNO之间产生一种动态平衡。本产品是一种基于生物素酰基替换法（Biotin Switch Technique, BST）原理，并能结合免疫印迹法（Western Blot）技术快速检测特定蛋白亚硝基修饰的检测试剂盒。产品中含有配套使用的各种缓冲液，无需再进行其他复杂特定试剂的配置，试剂盒中另含有配套专门使用的离心管装置，缩短实验周期，减少损耗提高成功率。
| 参数 | 规格 |
|---|---|
| 检测原理 | 生物素酰基替换法（Biotin Switch Technique） |
| 主要应用 | 特定蛋白的S-亚硝基化修饰检测（需先进行靶蛋白免疫沉淀） |
| 检测方法 | 免疫印迹法（Western Blot） |
| 结果读取 | 链霉亲和素-HRP（Streptavidin-HRP）化学发光检测 |
| 检测技术 | 可与Saville检测、化学显影、比色法、荧光法、质谱方法等互补使用 |
| 保存条件 | 参见组分表；不同组分按指定温度保存 |
| 运输条件 | 室温运输，不影响产品性能 |
| 试剂名称 | 组分编号 | 体积 | 储存条件 |
|---|---|---|---|
| LB Buffer 1 | Solution I | 38 mL | 4℃ |
| Reducing Reagent | Solution II | 1200 μL | 4℃/-20℃ |
| LB Buffer 2 | Solution III | 44 mL | 4℃ |
| Blocking Reagent | Solution IV | 120 μL | 4℃/-20℃ |
| +Vc Buffer | Solution V | 2000 μL | 4℃ |
| -Vc Buffer | Solution VI | 2000 μL | 4℃ |
| BMCC Buffer | Solution VII | 400 μL | 4℃/-20℃ |
| Strepdavidin-HRP | Solution VIII | 40 μL | 4℃/-20℃ |
| 试剂名称 | 组分编号 | 体积 | 储存条件 |
|---|---|---|---|
| LB Buffer 1 | Solution I | 8 mL | 4℃ |
| Reducing Reagent | Solution II | 300 μL | 4℃/-20℃ |
| LB Buffer 2 | Solution III | 9 mL | 4℃ |
| Blocking Reagent | Solution IV | 40 μL | 4℃/-20℃ |
| +Vc Buffer | Solution V | 400 μL | 4℃ |
| -Vc Buffer | Solution VI | 400 μL | 4℃ |
| BMCC Buffer | Solution VII | 80 μL | 4℃/-20℃ |
| Strepdavidin-HRP | Solution VIII | 40 μL | 4℃/-20℃ |
本试剂盒基于生物素酰基替换法（Biotin Switch Technique, BST）原理，通过三步实现特异性检测：1）甲基甲烷硫代磺酸酯（MMTS）封闭游离巯基；2）抗坏血酸（Ascorbate）特异性还原S-亚硝基化键，暴露新巯基；3）生物素-HPDP标记暴露的巯基；4）链霉亲和素-HRP Western Blot检测。该技术对S-亚硝基化修饰具有高度特异性。
信号缺失可能原因：1）靶蛋白在样本中无S-亚硝基化修饰；2）免疫沉淀效率低，靶蛋白富集不足；3）BST反应步骤（特别是抗坏血酸还原）条件不充分；4）Western Blot检测系统灵敏度不足。建议优化IP条件并验证各步骤效率。
不同组分保存条件不同：LB Buffer 1/2、+Vc Buffer、-Vc Buffer需4℃保存；Reducing Reagent、Blocking Reagent、BMCC Buffer、Strepdavidin-HRP需-20℃保存。建议收到后按单次使用量分装，避免反复冻融。工作液建议现配现用。
